巴佛洛霉素A1(粉末)

巴佛洛霉素A1(DMSO溶液)

Bafilomycin A1, from Streptomyces griseus

MB5506

巴佛洛霉素B1

Bafilomycin B1, from Streptomyces griseus

MB5507

巴佛洛霉素C1

Bafilomycin C1, from Streptomyces griseus

MB5512

巴佛洛霉素D

Bafilomycin D, from Streptomyces griseus

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.6056 mL

8.0279 mL

16.0557 mL

5 mM

0.3211 mL

1.6056 mL

3.2111 mL

10 mM

0.1606 mL

0.8028 mL

1.6056 mL

50 mM

–

–

–

ATPase 酶活性试验:

• ATPase酶测定培养基包含6 mM MgSO4，50 mM HEPES (pH 7.4)，200 mM Na2SO3 (V-ATPase 活化剂)，0.5 mM 原钒酸钠(P-ATPase抑制剂)，0.5 mM 叠氮化钠(F-ATPase抑制剂)和3 mM Na2ATP。该培养基(1.0 mL)加入或不加入V型ATPase抑制剂bafilomycin A1，与过滤的匀浆(0.1 mL)在23–25 °C下培养60分钟。通过加入1 mL 3%TCA停止反应。广谱测定的空白对照根据酶测定制备，除了组织样本是在酸之后加入。磷酸盐的分析通过加入2 mL正丁醇和0.2 mL 钼酸盐溶液(5 g 钼酸铵，22 mL H2SO4到100 mL)完成。涡旋15秒后，溶液用0.5 mL柠檬酸盐溶液(100 g/500 mL，pH 7.0)中和，再涡旋15秒。然后将溶液离心(2000×g；3分钟)以分离出丁醇相，其吸光度在400 nm下读出。制备标准正磷酸盐(0.1 μM–2.0 μM)，并以酶活性检测相同的方式处理。酶活性表示为每小时和每毫克蛋白质释放的正磷酸盐的微摩尔量。V-ATPase活性被认为是Na2SO3，原钒酸钠和叠氮化钠存在下测得的V-ATPase活性，与这些试剂和特定V-ATPases抑制剂Bafilomycin A1存在下测得的ATPase活性之间的差异。

细胞实验

• Cell lines: HeLa细胞
• Concentrations: ~20 nM
• Incubation Time: 20小时
• Method:

幽门螺旋杆菌加入HeLa细胞之前，用抑制剂处理，如下：10 mM DCCD在30℃下处理1小时；100 μM NBD-CI在30℃下处理1小时，反应用10 mM终浓度的甘氨酸阻断；275 μM NEM在30℃下处理1小时，通过加入275 mM β-巯基乙醇阻断反应；14 μM Mg-ATP在0℃下处理1小时；100 μM KNO3和14 μM Mg-ATP在30℃下处理1小时；100 μM NaCO3，pH 11在0℃下处理1小时。然后将细菌提取物加入细胞，稀释40倍，终浓度为0.65 mg/mL。对照组为HeLa细胞和未处理的细菌提取物，以及细菌提取物处理时相同环境下抑制剂Bafilomycin A1处理的细胞，稀释40倍后在相同的浓度下进行培养。分析细菌提取物的空泡活性。

动物实验

• Animal Models: 年幼的(大约9天大)莫三鼻口孵鱼，莫桑比克罗非鱼
• Formulation: 包含0.05 % 二甲基亚砜(DMSO)的鱼缸水
• Dosages: 10 μM
• Administration: —