LysoPrime Green – High Specificity and pH Resistance货号：L261

<可检测样品数>

每10 μl大约可检测10块35 mm dish或10块 μ-Slide 8 well Chamber Slides。

<保存上的注意事项>

● 长时间保存时，最理想的状态是封入氮气后-80℃保存。

● 本产品在冷冻(-20 ℃)条件下保存也会随时间缓慢变质。

如果没有-80℃的保存条件，建议尽早使用。

● 反复冻融易引发变质，应极力避免。

   溶酶体是常见的细胞器之一，由生物膜包裹多种分解酶组成的酸性胞内囊泡。溶酶体可以将细胞内的废物进行分解以维持细胞内各种状态的平衡。溶酶体的功能紊乱会造成或加剧包括神经退行性疾病在内的多种疾患，因此研究溶酶体对相关疾病机理的阐释及相应治疗药物的开发非常重要。

荧光探针活体染色是在研究溶酶体功能时最常用的手段，然而市面上的溶酶体荧光探针一般都存在特异性差和荧光强度随pH变化的问题。同仁化学研究所开发的LysoPrime Green荧光探针对溶酶体具有高度特异性，并且不易受pH值变化的影响，因此可以更准确的对溶酶体进行研究。另外，由于其细胞内的滞留能力强，还适用于需要长期荧光观察的实验。

使用LysoPrime Green(本产品)与市面上其他的溶酶体染料进行对比，并用溶酶体标记蛋白LAMP1-RFP表达的HeLa细胞进行验证。结果发现，其他产品在溶酶体以外的部位也有荧光，导致背景高。而LysoPrime Green的荧光背景受到有效控制(荧光图像Merged)。另外，在荧光图像的范围内检测荧光强度发现，LysoPrime Green比其他试剂的溶酶体染色部位的重合度更高。

LysoPrime Green(本产品)与市面上的其他产品都是在溶酶体集聚的荧光染料。然而随着溶酶体酸性抑制剂的Bafilomycin A1的作用，溶酶体pH由酸性向中性变化的过程中，其他产品逐渐离开溶酶体，荧光信号也显著下降。而LysoPrime Green却可以继续保持在溶酶体内，荧光强度几乎不变，与其他产品的荧光减弱形成鲜明的对比。

LysoPrime Green(本产品)与市面上的其他产品在相同实验条件下进行对比，其他产品在染色90分钟后，荧光强度有明显的下降，而LysoPrime Green由于在溶酶体内的停留性能高，仍然可以维持高荧光强度。

此外，LysoPrime Green和其他产品染色HeLa细胞后，上流式细胞仪检测的结果发现，与“先胰酶消化再染色”的结果相比，其他产品的“先染色再胰酶消化”的结果的荧光强度有明显下降，而LysoPrime Green的胰酶处理前后的染色结果相差很小，说明LysoPrime Green的停留性能更强。

<检测条件>

Filter: FITC (Ex = 488 nm, Em = 515-545 nm)

用LysoPrime Green与LysoTrakcerTM Red同时对HeLa细胞染色后，用溶酶体抑制剂Bafilomycin A1处理后进行荧光观察。LysoPrime Green的荧光强度不受Bafilomycin A1作用的影响，而LysoTrackerTM Red的荧光强度伴随着BafilomycinA1的作用而不断降低。同时使用这两种试剂一起染色，使得溶酶体位置与pH变化的同时检测成为可能。另外，通过荧光酶标仪检测的话，还可以得到数值化的检测结果。

将外泌体染料ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red(货号:EX03)染色后的外泌体加至LysoPrime Green染色的HeLa细胞。随着时间的推进，LysoPrime Green的荧光强度维持不变，而ExoSparkler Deep Red的荧光强度随时间不断增强(左图)。另外，通过添加可以抑制内体向溶酶体转变的抑制剂Bafilomycin A1，与未经抑制剂处理的Control组相比，Bafilomycin A1抑制组的细胞中没有ExoSparkler Deep Red的荧光，说明Bafilomycin A1的添加有效抑制了内体的成熟(右图)。

用细胞自噬检测试剂DAPRed-Autophagy Detection(货号：D677)与LysoPrime Green或其他公司产品共染色HeLa细胞，经氨基酸饥饿处理后检测荧光。由于其他公司产品的荧光强度弱，无法长时间的对溶酶体荧光观察，而LysoPrime Green的荧光强度更高并且可以长时间染色，因此，与DAPRed的共染色结果，可以更准确的检测细胞自噬。

用线粒体自噬检测试剂盒Mitophagy Detection Kit(货号：MD01)与LysoPrime Green或其他公司产品共染色SHSY-5Y细胞，经线粒体自噬诱导后检测荧光。由于其他公司产品的荧光强度弱，无法长时间的对溶酶体荧光观察，而LysoPrime Green的荧光强度更高并且可以长时间染色，因此，与Mtphagy Dye的共染色结果，可以更准确的检测线粒体自噬。