超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—BMPO货号:B568

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—BMPO货号:B568
5-tert-Butoxycarbonyl-5-methyl-1-pyrroline-N-oxide
BMPO
商品信息
储存条件:-20度保存,防潮
运输条件:室温
分子式:

C10H17NO3

分子量:

199.25

特点:

•纯度高

•杂质峰少

•灵敏度高

选择规格:
50mg

 

凑单关联产品TOP5

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产品概述

自旋捕捉技术是当今检测和鉴别不稳定自由基的最可靠的手段之一。顺磁共振波谱 (EPR) 捕捉剂能够成功的检测体内或体外生成的超氧自由基和羟自由基等。

BMPO是同仁化学研究所 (DOJINDO) 自主开发生产的新型高效、高稳定型自由基捕捉剂。它在捕捉自由基能力上优于PBN、DMPO等一般捕获剂,与自由基的结合能力更强,半衰期 (t½=23 min) 更长,ESR谱图能够明显的区别不同的自由基结构如:GS•和•OH。BMPO检测结果可靠性高、重复性强。由于具有高水溶性的特点,更利于水相体系自由基的研究,尤其是生物体系的自由基研究。

应用

自旋捕获剂,EPR(ESR)检测,超氧阴离子,羟基自由基

产品特点

•半衰期长,可检测自由基加合物

•高水溶性

•更高的信噪比

化学结构式

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操作步骤

常规检测步骤 (*本数据仅供参考,具体参数可能因仪器厂家的不同而适当调整)

检测芬顿 (Fenton) 反应所产生的羟自由基:

1. 将1.5 mg的BMPO溶解于5 ml的超纯水。

2. 取15 μl的BMPO溶液,75 μl的1 mM的H2O2和75 μl的100 μM的FeSO4加入到50 μl的超纯水中。

3. 放置一段时间 (例如1 min) 将溶液转入EPR样品管中检测。

4. 通过峰值计算相对强度。

检测黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶体系 (XO) 所产生的超氧自由基:

1. 溶液A:将1 mg的BMPO溶解于1 ml的浓度为50 mM的PBS溶液 (pH 7.4)。

2. 溶液B:用50 mM的PBS溶液 (pH 7.4) 配制含有1 mMDTPA和0.4 mM黄嘌呤的混合溶液。

3. 溶液C:用50 mM的PBS溶液 (pH 7.4) 配制含有0.1 U/ml的黄嘌呤氧化酶溶液。

4. 取15 μl溶液A,135 μl溶液B和10 μl溶液C混合。

5. 放置一段时间 (例如 8 min) 将溶液转入EPR样品管中检测。

6. 通过峰值计算相对强度。

实验例

(*本数据仅供参考,具体参数可能因仪器厂家的不同而适当调整)

*本数据均由Bruker公司EPR仪器检测得出,由于BMPO的分子结构在平面上下差异较大,使得图中BMPO/•OH的两种异构体的超精细结构常数较大能够被ESR分辨出来。本实验中BMPO/•OH的两种立体异构体与BMPO/•OOH的构成相似,两种BMPO结合物的适宜条件为:

构象异构体 (conformer)Ⅰ:

aN =13.47 G,aH

aHβ=15.31 G,aH

aHγ1 = 0.62 G

构象异构体 (conformer)Ⅱ:

a=13.56 G,aH

aHβ=12.3 G,aH

aHγ1 = 0.66 G

超氧化物检测操作流程

1. 用100 mM的PBS溶液 (pH 7.4) 制备浓度为25 μM的DTPA,作为过渡金属螯合剂。

2. 用100 mM PBS (pH 7.4)配制1 mM次黄嘌呤溶液。

3. 配制1 U/ml的黄嘌呤氧化酶溶液。

4. 将10 mg的BMPO溶于200 μl的PBS溶液中。(终浓度约为 250 mM)。

5. 向EP管中加入70 μl缓冲液。

6. 继续添加20 μl浓度为250 mM的BMPO和100 μl步骤2中准备的1 mM的次黄嘌呤溶液。

7. 加入10 μl黄嘌呤氧化酶触发反应,将EP管漩涡震荡后转移到扁平池。

8. 上样并调整参数,获得图谱。

溶液终浓度为:25 mM BMPO, 0.5 mM次黄嘌呤和0.05 U/ml的黄嘌呤氧化酶。

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羟自由基操作流程

1. 分别准备1 mM的FeSO4,10 mM的H2O2和250 mM的BMPO水溶液。

2. 向EP管中加入140 μl的超纯水。

3. 继续加入20 μl浓度为250 mM的BMPO和20 μl浓度为1 mM的FeSO4

4. 加入20 μl浓度为10 mM的H2O2,触发反应。

5. 混合并迅速转移至扁平池中。

6. 上样并调整参数,获得图谱。

溶液终浓度为:25 mM BMPO,0.1 mM FeSO4和1 mM H2O2

*建议实验人员做背景图片,以在EPR图谱中排除自选杂质的干扰。

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相关参考数据

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超氧化物信号强弱随时间的变化曲线和半衰期时间

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*BMPO检测超氧阴离子O2•-的半衰期 (pH=7.4) 更长。因此更适合长时间观察样品的实验。(如检测生物酶反应)