HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号:LK15

HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号:LK15
HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

选择规格:
3samples

试剂盒内含

image.png

产品概述

NH2-reactive HiLyte FluorTM 647是试剂盒的成分之一,它有一个琥珀酰亚胺基(NHS),能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 647最多能够标记200 μg的IgG,每个IgG分子可与4-6个HiLyte FluorTM 647分子共价结合。标记过程十分简单,只需要在特制的过滤膜上将NH2-reactive HiLyte FluorTM 647加入到IgG溶液中,然后在37℃下培养10分钟。过量的HiLyte FluorTM 647能够用过滤管除去。被HiLyte FluorTM 647标记后的IgG的激发和发射波长分别为652 nm和673 nm。

* HiLyte FluorTM为AnaSpec,Inc公司的商标

原理

1606887358923957.png

荧光特性

1606887418457240.png

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中,IgG或者HiLyte FluorTM 647-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质,如BSA或明胶时,在使用该试剂盒标记前,先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits(不包含于本试剂盒 中)来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物,离心后取上清液来进行标记。

5. 如果长时间不使用,建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive HiLyte FluorTM 647放在-20℃冰箱中保存,不需要充氮气,可以更好地保持标记试剂的活性,但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中,仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤

(1)将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a)

(2)8,000-10,000g离心10分钟。b)

(3)将10μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM647中并用移液器吹打使其溶解。c)

(4)将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive HiLyte FluorTM647溶液加入到过滤管中,吹打使其混合。d)

(5)将过滤管放入培养箱中,37℃培养10分钟。

(6)将100μl WS buffer加入到过滤管中,8,000-10,000g离心10分钟,b)除去滤液。

(7)将200μl WS buffer加入到过滤管中,8,000g离心10分钟,b)重复该步骤一次。

(8)将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e)将该溶液转移到0.5ml试管中,在0-5℃下保存。

image.png

a)样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml,重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl,则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b)如果溶液在离心后仍然残留在膜上,可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c)NH2-reactive HiLyte FluorTM647在管子的底部,向管底加入10μl DMSO,吹打数次使其溶解。

d)如果IgG的量为200μg,加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM647溶液。

e)并不一定要使用WS buffer来回收标记产物,可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1)荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2)可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3)可以标记50至200μg的蛋白质。

4)可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5)荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗?
A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。
Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管?
A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时,可以不使用过滤管来过滤,只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555(由步骤3所得)混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。
Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗?
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。
Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少?
A:IgG的最小量为10 μg。IgG的量在10 μg-100 μg之间时,标记比率是相同的。
Q5:标记产物能保存多久?
A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久,可以添加等量的丙三醇,并在-20℃下存放。但是,还要注意样品自身是否稳定。