特点：
● 无需任何操作技巧
● 与超速离心法相当的回收率
● Filter Holder可重复利用
规格性状
产品概述
ExoIsolator Exosome Isolation Kit可以从细胞培养上清液中快速分离出外泌体， 其回收率与超速离心法相当。试剂盒中内含的 Isolation Filter可以将细胞培养上清液中的外泌体捕获分离，因此无需复杂的操作即可在短时间快速获取外泌体。
简单的操作：无需任何操作技巧
ExoIsolator Exosome Isolation Kit的操作过程极为简单。组装好Filter Holder和Isolation Filter进行减压过滤，再用PBS回收过滤膜表面上的外泌体即可。这种方法可以尽可能的减少外泌体的损失，而且不易产生人为操作因素上的差别。
回收效率高：与超速离心法相当
目前最常用的外泌体分离方法是超速离心法，使用超速离心法和ExoIsolator Exosome Isolation Kit同时回收HEK293S细胞培养液中的外泌体，通过外泌体粒度分布(图1)、粒子数(图2a)和外泌体marker的表达量(图2b)检测两种方法得到的外泌体并进行比较。结果可以看出，两种方法得到的外泌体的粒度分布和粒子数基本相同，而外泌体marker的表达量的结果显示，在相同蛋白量的情况下，ExoIsolator 的外泌体标志物更高，说明ExoIsolator 比超速离心法得到的外泌体纯度更高。(专利申请中)
图1. 提取得到的外泌体的粒度分布
图2. 粒子数(a)与外泌体标志物的表达量(b)
试剂盒的组成
本试剂盒包含Filter Holder和Isolation Filter，其中Filter Holder可以通过高压蒸汽锅灭菌后重复使用。
另外，作为消耗品的Isolation Filter 10枚装 单独销售。
具体请参考产品页面：货号EX11 产品名：ExoIsolator Isolation Filter。
FAQ
| Q：如果没有顺利的提取外泌体，可能的原因有哪些？ |
| A： 可能有以下三方面原因。 1. 过滤时减压的强度过高会使外泌体回收量显著降低。真空泵的推荐压强为-25 kPa，或比-25 kPa更弱。
2. Isolation Filter分为正反两面，安装时的如果方向错误会导致外泌体回收量显著降低。请务必将Isolation Filter的正面(光泽面)向上，具体请参考说明书或操作视频。 3. 为了完全回收Isolation Filter表面上的外泌体，请用PBS反复多次的流过过滤膜的全部表面，具体请参考说明书或操作视频。 |
| Q：分离得到的外泌体是否可以长期保存？ |
| A：4℃可以保存1个月~半年。长期保存时请-80 ℃保存并尽量避免反复冻融，建议分成小包装分开保存。
参考资料(日语)：吉冈祐亮、落谷孝広(2020)、エクソソーム実験ガイド ISBN: 978-4-7581-2246-7。 |
| Q：用含有血清的培养基培养的细胞培养上清液是否可以提取外泌体？ |
| A：不推荐使用含有血清的培养基。由于血清(FBS等)中也含有外泌体，分离得到的外泌体中也会含有血清中的外泌体，对结果产生干扰。 |
| Q：ExoIsolator的回收率是多少？ |
| A：不同检测样品的外泌体回收率也不同。 下面是从市面上销售的纯牛奶中提取的外泌体回收率供参考。
蛋白质回收率(%)粒子回收率(%)：34.6%(SD±3.9)38.3(SD±8.3) |
| Q：从细胞培养上清液中可以得到多少外泌体？ |
| A：细胞的种类和培养条件都会对外泌体的量有影响。下面是25 ml HEK293S细胞(振动培养)的培养上清中分离出来的外泌体的量。
回收的蛋白质的质量(μg)回收的粒子数(particles)：11.2(SD±2.09)6.0E+09(SD±1.0E+9) *蛋白质检测采用的BCA法， 粒子数通过NTA分析检测。 |
| Q： 可以回收的外泌体的尺寸是多少？ |
| A： 可以回收大约100-200nm的尺寸。
（参考） 从HEK293S细胞培养上清回收的外泌体的粒度分布
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| Q： 一个filter可以处理的样本量是多少？ |
| A： 对于培养基上清液，我们建议使用25ml。
随着样品体积的增加，减压过滤时间也会增加。 例如，如果使用25ml HEK293S细胞培养上清液（11.2μg蛋白质），则减压过滤大约需要5-10分钟。 抽滤的时间不仅取决于样品的体积，还取决于样品中所含的外泌体和蛋白质的量。 |
| Q：如果不知道抽吸装置的吸气压力。我该怎么处理？ |
| A： 您可以通过单独准备一个显示吸入压力的压力表来检查吸入压力。 |
| Q： 减压过滤的时间过长。过滤器堵塞。可能的原因是什么？ |
| A： 请检查以下三种可能的原因。
1、如果样品体积太大或样品中的蛋白质浓度太高，抽滤时间可能需要更久。 处理HEK293S细胞上清液时的样品体积和过滤时间参照： 25毫升（11.2μg蛋白质）：5-10分钟 50毫升（22.4μg蛋白质）：30-60分钟 2、如果减压压力太低太低，过滤时间会更长。 处理25ml HEK293S细胞上清液时的抽滤压力和过滤时间参照： 抽滤压力-25千帕：5-10分钟。 抽滤压力-10千帕：10-20分钟 3、如果包含大量其他物质，而不是外泌体，则可能发生堵塞。 建议事先用0.22μm的 filter 处理样品。 |
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