NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,固定化 T4 DNA 连接酶#M0569S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

固定化 T4 DNA 连接酶

#M0569S 1.1 mg

产品特点

· 固定化 T4 DNA 连接酶(IM T4 DNA Ligase)由 T4 DNA 连接酶和磁珠组成,两者由共价键连接。

· 使用磁力可轻松去除反应中的酶
· 避免热失活步骤对下游应用的干扰
· 固定化酶可重复使用
· 开启新的工作流程和应用

产品说明

 T4 DNA 连接酶催化双链 DNA RNA 上相邻的 5´-磷酸基末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNARNA DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1)。

固定化 T4 DNA 连接酶(IM T4 DNA Ligase)是包被有 T4 DNA 连接酶的磁珠悬浮液,以 10 mg/ml 的溶液(50% 甘油)提供,每微升溶液的有效浓度为 60 粘性末端单位CEU)。反应完成后,体系中的酶可使用磁力去除,然后可重复使用。

  固定化 T4 DNA 连接酶在不同温度下的相对活性

Temperature

% Activity

16ºC

100%

25ºC

100%

37ºC

50%

 

 

固定化 T4 DNA 连接酶在不同 NEB 缓冲液中的活性

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图 1:固定化 T4 DNA 连接酶成功连接 Lambda DNA-HindIII 消化产物

 

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根据产品说明书推荐步骤,分别使用无连接酶、可溶性 T4 DNA 连接酶(NEB #M0202)、固定化 T4 DNA 连接酶(NEB #M0569)对 Lambda DNA- HindIII 消化产物(NEB #N3012)进行连接。结果显示,可溶性酶和固定化酶的连接效果一致。

 

图 2:固定化 T4 DNA 连接酶可重复使用

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将固定化 T4 DNA 连接酶(NEB #M0569)置于快连缓冲液中,对 Nanopore 接头进行连续夹板连接,数据显示:经过 20 次连续连接反应后,酶活仍不受影响。