Fluo-4 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。Fluo-4 AM将Fluo-3 AM结构中的氯原子替换成了氟原子，导致它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长488 nm，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度会比Fluo-3强一倍。由于Fluo-4与钙离子的亲和力和Fluo-3相近，所以使用上和Fluo-3基本相同，可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。