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HEX phosphoramidite, 6-isomer

HEX phosphoramidite for oligonucleotide synthesis, pure 6-isomer.

HEX (hexachlorofluorescein) is a fluorescein derivative with emission in the yellow spectrum range (absorption maximum at 533 nm, emission maximum at 549 nm).

HEX phosphoramidite is used for synthesis of fluorescent-labeled primers and hybridization probes such as TaqMan, Molecular Beacon, and Scorpion for qPCR. HEX is most effectively quenched by non-fluorescent DusQ1 dark quencher because of significant overlapping of their spectra (convenient for use with DusQ1 CPG 500 solid support with a pore size of 500 Å). Many automated sequencers based on capillary gel electrophoresis have a detection channel for HEX. Therefore, this phosphoramidite is commonly used for synthesis of 5’-labeled oligonucleotides for fragment analysis, particularly for microsatellite analysis, when microsatellite loci are amplified using a fluorescent-labeled forward primer and a non-labeled reverse primer.

用于寡核苷酸合成的 HEX 亚磷酰胺，纯 6 异构体。

HEX（六氯荧光素）是一种荧光素衍生物，在黄色光谱范围内发射（最大吸收在 533 nm，最大发射在 549 nm）。

HEX 亚磷酰胺用于合成荧光标记的引物和杂交探针，例如用于 qPCR 的 TaqMan、Molecular Beacon 和 Scorpion。 HEX 最有效地被非荧光 DusQ1 暗猝灭剂猝灭，因为它们的光谱有显着重叠（便于与孔径为 500 Å 的 DusQ1 CPG 500 固体支持物一起使用）。 许多基于毛细管凝胶电泳的自动测序仪都有一个 HEX 检测通道。 因此，当使用荧光标记的正向引物和未标记的反向引物扩增微卫星基因座时，这种亚磷酰胺通常用于合成 5′ 标记的寡核苷酸以进行片段分析，特别是用于微卫星分析。

Usage

Coupling: 3 min.

Deprotection: standard conditions using 25% ammonium; deprotection time depends on oligonucleotide composition and nucleobase protecting groups (deprotection for 17 h at 55 °С removes all protecting groups from standard nucleobases). AMA (solution of concentrated aqueous ammonium/40% aqueous methylamine 1:1 v/v) can be used with ~5% of non-fluorescent side product forming. To avoid formation of the side product, start deprotection with ammonium hydroxide (30 min at room temperature), then add an equal volume of 40% aqueous methylamine and continue deprotection as required with AMA (e.g. 10 min at 65 °C).

耦合：3 分钟。

脱保护：使用 25% 铵的标准条件； 脱保护时间取决于寡核苷酸组成和核碱基保护基团（在 55°C 下脱保护 17 小时会去除标准核碱基上的所有保护基团）。 AMA（浓铵水溶液/40% 甲胺水溶液 1:1 v/v）可用于形成约 5% 的非荧光副产物。 为避免形成副产物，用氢氧化铵开始脱保护（室温下 30 分钟），然后加入等体积的 40% 甲胺水溶液，并根据需要使用 AMA 继续脱保护（例如，在 65°C 下 10 分钟）。