转染试剂——HilyMax货号:H357

转染试剂——HilyMax货号:H357
阳离子脂质体转染试剂
HilyMax
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

·脂质体转染试剂,毒性低

·胞慢病毒转染率高

·实验案例丰富

选择规格:
0.5 ml
1 ml

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

NO.4.    Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

试剂盒内含

1 ml             HilyMax Reagent           1 tube×1

Lipoform Buffer             1.0 mL×1

产品概述

HilyMax 是Dojindo公司研发的一种新型阳离子脂质体基因转染试剂,可用于高效转染多种细胞系及siRNA。HilyMax具有不受培养基中血清影响,转染过程不需更换培养基等特点。另外HilyMax试剂中不含影响转染效率的成分。

产品特性

应用:基因转染

特点:

1.实验操作简单

2.可用于贴壁细胞和悬浮细胞的瞬转及稳转。

3.适用于含血清的的培养基,毒性低,转染效率高且稳定。

4.适用于SiRNA的转染实验。

5.与同类进口产品相比,价格较低。

订购前请来电咨询各细胞系的相关条件优化

各细胞系GFP转染实例

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实验操作

基本操作:转染步骤(24孔板)a)

1.细胞准备

贴壁细胞:转染前一天,调整细胞浓度在0.5 ml的培养基中预先接种40%-90%的汇合细胞b),转染前将细胞悬液接种至24孔板。

悬浮细胞:转染前一天,调整细胞浓度至每0.5 ml的培养基中0.1-1.6×106的细胞,细胞悬液接种至24孔板。

2.形成DNA-HilyMax转染复合物c)

添加不含血清的培养基至消毒离心管。d)

添加质粒DNA(0.5-1,5μg)至离心管,使用移液器充分混合。

添加HilyMax至离心管,使用移液器充分混合,推荐的DNA(μg)与HilyMax的使用比率为1:2-1:6。

在室温下培养15分钟 e)

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3.添加转染复合物至细胞:在步骤1准备好的培养板上,每孔中添加DNA-HilyMax转染复合物。

4.培养:在37℃下放置于CO2培养箱培养。f)

5.检测:确保转染后24至72小时,基因的活性

a)实验用量需要根据培养板大小而改变,请参考说明书“不同培养板转染状况”部分。

b)培养基中血清成分不会影响转染效果。

c)DNA及HilyMax的参考密度见表1。

d)培养基中的血清及抗生素会影响DNA-HilyMax转染复合物的形成。Opti-MEM, DMEM和MEM不会影响转染效果,请使用其他培养基来检验转染效率。

e)培养时间超过30分钟会造成转染效率偏低。

f)转染后更换培养基可以有效地提高转染效率,降低某些细胞系的毒性。

 

转染复合物中DNA与HilyMax的使用量:

表1:表明了不同细胞密度下推荐的DNA和HilyMax量。如果转染效率较低,请适当提高HilyMax的量;

如果毒性过高,请适当降低HilyMax的使用量。

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表2:表明了不同大小培养板的系数。这些系数是在24孔板下计算得出的,表1中DNA和HilyMax的数据可以乘上这些系数。

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不同培养板转染状况:

表3:不同培养板适合的培养基、DNA的使用量以及DNA和HilyMax混合比率列。

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NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7推荐转染条件:

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7在24孔板培养的最适转染条件显示在表4中,每种细胞系DNA和HilyMax溶液最适量及其密度以及转染实验的基本操作。

若使用其他培养板请参考表3。

 

转染后培养基的更换:

转染后更换培养基可以有效地提高NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7的转染效率(请见表图)。

这五种细胞系转染后2到4小时更换培养基可以获得更高的转染率。

 

表4:五种细胞的实例

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24孔板上转染发生于80%汇合细胞中, DNA和 HilyMax 分别为 1μg和3-7μl。转染1至8小时后,更换新的培养基

 

有详细操作方案的细胞种类:

(欢迎来电或邮箱索取各细胞系操作优化条件)

・A549 Cell ・HepG2 Cell ・MDCK Cell ・Caco2 Cell ・K562 Cell

・Neuro2a Cell ・Vero Cell ・CHO Cell ・L6 Cell ・NIH3T3 Cell

・HEK293 Cell ・LNCap Cell ・PC3 Cell  ・HeLa Cell ・MCF7 Cell ・PC12 Cell

技术情报

使用HilyMax及I社产品转染率对比

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使用HilyMax及R社产品Luciferase表达比较

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★细胞系:用于HEK293、NIH3T3、CHO、HeLa、COS-7转染效果较好,具体请参考下列图表(实验案例)

★DNA:用于纯化质粒DNA(A280/A260=1.7-1.9)推荐转染的DNA浓度为0.15-1.0 mg/ml。转染中DNA的最佳使用量取决于细胞的类型及细胞密度。

★HilyMax:转染时HilyMax的最佳使用量取决于细胞的类型及细胞密度。若HilyMax使用量过低会致使转染效率低,而使用量过高则会产生较强的毒性,请在第一次实验时把DNA(μg)与HilyMax的使用比率控制在1:1-1:6之间。

★细胞密度:推荐的转染细胞密度为40%-90%的汇合细胞,最佳细胞密度取决于细胞类型。

★转染后培养基的更换:在转染后更换培养基可以提高转染效率,还可降低一些细胞系的毒性。推荐转染2到4小时后更换培养基

HilyMax的使用准备:

添加1.0 ml Lipoform缓冲液于HilyMax试剂中,使用涡旋器振荡混合30秒。请检查HilyMax试剂是否完全溶解,如果溶液中仍有部分不溶残留物,需继续振荡或使用移液器充分混匀,直到完全溶解。

提醒:转染效率与细胞种类、细胞浓度以及DNA与HilyMax的混合比例等情况有关,请参照以下优化条件操作。

储存注意事项:

试剂盒保存在0-5℃

添加过Lipoform缓冲液的HilyMax溶液在-20℃下可以储存6个月。

若经常使用, HilyMax溶液可放置于在0-5℃下, 请在1-2个月内用完。

解冻开启过的HilyMax溶液,需使用涡旋器和移液器使其充分混匀。

HilyMax溶液在反复冷冻和解冻后会有小部分出现不溶,但这并不会影响转染效果。

参考文献

1. Mammalian polymerase h promotes alternativeNHEJ and suppresses recombination, Nature, 2015, 518, 254-257

2. A combinatorial F box protein directed pathway controls TRAF adaptor stability to regulate inflammation,Nature Immunology, 2013, 14, 470-479

3. F-box protein FBXL2 targets cyclin D2 for ubiquitination and degradation to inhibit leukemic cell proliferation,Blood, 2012, 119(13), 3132-3141

4. Dual Roles of Notch in Regulation of Apically Restricted Mitosis and Apicobasal Polarity of Neuroepithelial Cells,Neuron, 2011, 69, 215-230

5. Facile target validation in an animal model with intracellularly expressed monobodies,Nature Chemical Biology, 2018, 14, 895-900

6. Living functional hydrogels generated by bioorthogonal cross-linking reactions of azidemodified cells with alkyne-modified polymers, Nature Communications, 2018, 9, 2195

7. Structural insights into the competitive inhibition of the ATP-gated P2X receptor channel,Nature Communications, 2017, 8(1), 876

8. Critical roles of nardilysin in the maintenance of body temperature homoeostasis,

Nature Communications, 2014, 5, 3224

9. Relative motions between left flipper and dorsal fin domains favour P2X4 receptor activation,Nature Communications, 2014, 5, 4189

10. Rhythmic binding of Topoisomerase I impacts on the transcription of Bmal1 and circadian period,Nucleic Acids Research, 2012, 40(19), 9482-9492

11. MEF/ELF4 transactivation by E2F1 is inhibited by p53, Nucleic Acids Research, 2011, 39(1), 76-88

12. CD52 as a molecular target for immunotherapy to treat acute myeloid leukemia with high EVI1 expression,Leukemia, 2011, 25, 921-931

13. Druggable negative allosteric site of P2X3 receptors, Proc. Natl. Acad. Sci., 2018, 115(19), 4939-4944

14. PARP-1-dependent recruitment of cold-inducible RNA-binding protein promotes double-strand break repair and

genome stability, Proc. Natl. Acad. Sci., 2018, 115(8), E1759-E1768

15. Enhancement of β-catenin activity by BIG1 plus BIG2 via Arf activation and cAMP signals,

Proc. Natl. Acad. Sci., 2016, 113(21), 5946-51

16. Transcriptome analysis of distinct mouse strains reveals kinesin light chain-1 splicing as an amyloid-β accumulation

modifier, Proc. Natl. Acad. Sci., 2014, 111(7), 2638-43

17. Arf guanine nucleotide-exchange factors BIG1 and BIG2 regulate nonmuscle myosin IIA activity by anchoring myosin

phosphatase complex, Proc. Natl. Acad. Sci., 2013, 110(34), E3162-70

18. EDEM Function in ERAD Protects against Chronic ER Proteinopathy and Age-Related Physiological Decline in

Drosophila, Developmental Cell, 2017, 41, 652-664

19. MicroRNA-200a promotes anoikis resistance and metastasis by targeting YAP1 in human breast cancer,

Clinical Cancer Research, 2013, 19(6), 1389-99

20. Long noncoding RNA ELIT-1 acts as a Smad3 cofactor to facilitate TGF-β/Smad signaling and promote

epithelial-mesenchymal transition, Cancer Research, 2019, 79(11), 2821-2838

21. Loss of NDRG2 Expression Confers Oral Squamous Cell Carcinoma with Enhanced Metastatic Potential,

Cancer Research, 2017, 77(9), 2363-2374

常见问题Q&A

Q1、基因转染后需要更换培养基吗?
A1、如果您想让细胞毒性更低或者转染效率更高一些,建议更换培养基。但是有些细胞(如CHO细胞)案例,更换培养基不会影响毒性和转染率。
Q2、转染效果不好的情况下,应当考虑调整哪些方面?(DNA量,HilyMax量,复合物形成比,时间等)
A2、<细胞毒性低>

转染效率极低的情况下,可以增加DNA量,或是DNA(μg):HilyMax(μL)=1:5~1:9。

可以提高转染效率。

<细胞毒性高>

可以减少DNA量或HilyMax量。

Q3、说明书中写了保存条件为“冷藏”和“冷冻”两种。怎么保存比较好呢?一开始就冷冻,一直冷藏是不行的吗?
A3、未开封、未使用时请“冷藏保存”,试药和缓冲液混合溶解后请“冷冻保存”。即使在未开封的状态下冷冻保存,质量也没有问题,但是使用时需要将冷冻的Lipoform Buffer融化。

另外,溶解后如果在2~3周内用完的话,即使“冷藏保存”也不会影响性能。超过数周使用时,请务必“冷冻保存”。

Q4、DNA-Hilymax 转染复合物培养是否超过30分钟?
A4、超过30分钟的培养会造成过低的转染率。
Q5、DNA和Hilymax的量是否为最优比率?
A5、 DNA和Hilymax的量的比率会较大影响转染效率,请参考表1优化转染。某些条件下,增大DNA或HIlymax的使用量会提高转染效率,如果转染效率仍很低,那么优化后请改变DNA(ug):Hilymax(ul)比率至1:7-1:9或把DNA量提高到1.5-2倍。若毒性过强,请降低Hilymax在DNA-Hilymax转染复合物中的比率。