超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—DMPO货号:D048

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—DMPO货号:D048
5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物
DMPO
商品信息
储存条件:-20度保存,防潮,避光
运输条件:室温
分子式:

C6H11NO

分子量:

113.16

特点:

● 纯度高

● 杂质峰少

选择规格:
1ml

凑单关联产品TOP5

NO.1.    TEMP    单线态氧检测

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规格性状

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质量约为1.1g

产品概述

由于具有潜在的致癌风险和促进衰老的作用,生物体内的自由基已成为研究的热点。 DMPO是研究自由基最常用的自旋捕获剂。 它适用于捕获氧自由基,尤其是超氧化物,并生成具有特征的EPR信号的加合物。 但是,大多数市售的DMPO包含会引起高背景的杂质。 因此,这些DMPO需要进一步纯化才能在EPR上进行实验。 Dojindo的DMPO实行严格的质量管控,没有杂质引起的背景问题,因此不需要任何预纯化处理。

产品特点

•超高纯度

•更高的信噪比

•无需预纯化

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同仁化学研究所 (Dojindo) 的DMPO没有杂质 (*) 检出

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以羟自由基的Fenton反应(黑色)和空白(蓝色)为例,同仁化学研究所(Dojindo)的峰更清晰,S/N比例更高

应用

自旋捕获剂,EPR(ESR)检测,超氧阴离子,羟基自由基

原理

自旋捕捉ESR技术是一种检测活性氧的最可靠的办法,它能提供具有特征的ESR信号。DMPO采用一种特殊的敏感方法,可以捕捉超氧阴离子和羟自由基等,分别产生独特的ESR光谱。因此它是探测生物系统内ROS的强有力工具。

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操作步骤

SOD清除超氧阴离子活性检测

1. 将15 μl的DMPO溶液和 50 μl的5 mM的次黄嘌呤加入到35 μl的0.1 M的磷酸盐缓冲液 (pH 7.8) 中。

2. 加入50 μl的待测SOD标准品或待测样品,涡旋振荡 1-2 s。

3. 加入50 μl的0.4 U/ml的黄嘌呤氧化酶之后立即涡旋振荡。

4. 放置一段时间 (例如 1 min) 将溶液转入ESR样品管中检测。

5. 通过峰值计算相对强度(DMPO-O2-/Mn2+)。

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C-,N-,S-基自由基的检测

1. 制备100 mM含有25 μM Diethylenetriaminepentaacetic Acid (DTPA)的磷酸盐缓冲液 (pH 7.4),作为过渡金属螯合剂。

2. 制备以下过氧化物酶底物:A) 100 mM 甲酸钠(HCOONa);B) 100 mM氰化钾(KCN);C) 100 mM叠氮钠(NaN3);D) 含有100 mM亚硫酸钠 (Na2SO3)的100 mM磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)。

3. 制备4.0 mg/ml(~100 μM)的辣根过氧化物酶 (HRP)溶液和1 mM H2O2溶液。

4. 制备浓度为1 M的DMPO溶液。

5. 在离心管中加入130 μl的缓冲液,加入20 μl已配好的1 M的DMPO溶液,再加入20 μl底物储存液,10 μl的1 mM H2O2溶液,最后加入20 μl HRP触发反应。

6. 涡旋振荡离心管,加入到进样系统中,检测图谱。

7. 加样后调节光谱并得到图谱。各物质的终浓度为:100 mM DMPO,10 mM的底物,50 μM H2O2,10 μM HRP。

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数据和操作流程由Bruker公司友情提供