特点：
● pH敏感型荧光标记染料
● 试剂盒包括所有试剂
● 详细的标记手册
产品概述
本款试剂盒一套试剂盒就包含了全部所需材料，可以对目标物质的内吞作用进行可视化分析。
试剂盒中包含的NH2-反应性AcidSensor（荧光探针）具有分子内活性酯基，与含氨基的目标物质（蛋白质）混合后形成稳定的共价键。AcidSensor标记后可在633纳米处被激发，可满足同时与绿色或红色荧光进行多重染色。
AcidSensor标记后在中性条件下几乎没有荧光，而在细胞中受环境酸化影响后会发出荧光，并被内吞作用所吸收。
*注意：
・与内吞作用的检测染料ECGreen（产品代码：E296）不同，本试剂盒是对进入细胞的目标物质进行染色。
本试剂盒可以标记分子量超过50,000和含有活性氨基的样本。
・本试剂盒也会标记分子量在10,000以上的除标记样本以外的含氨基的共存物质，这些物质也会被标记和回收。请在使用前对样品溶液进行纯化。
原理
AcidSensor的反应原理与细胞内吞途径的示意图
与其他产品的比较
与内体染料共染
标记的IgG的细胞摄取量随时间变化
用本试剂盒的AcidSensor标记的小鼠IgG和Dojindo的内吞检测染料（货号E296, ECGreen -Endocytosis Detection）一同添加到HeLa细胞中。
染色后10分钟、20分钟和180分钟观察细胞，结果显示AcidSensor（深红色）和内体膜（绿色）在同一位置定位，表明小鼠IgG是通过内吞作用途径被细胞吸收的。
＜检测条件＞
绿：ECGreen
(Ex = 405 nm, Em= 500-550 nm)
紫：AcidSensor
(Ex = 633 nm, Em= 650-700 nm)
使用AcidSensor标记的BSA和小鼠IgG被HeLa细胞吸收的情况
使用该试剂盒将标记的BSA或小鼠IgG加入HeLa细胞中，2小时后观察HeLa细胞的吸收情况。
结果，在HeLa细胞中检测到了AcidSensor的荧光，证实两种标记的物体都被内吞途径吸收了。
＜检测条件＞
仪器:共聚焦显微镜
Ex = 633 nm, Em = 650-700 nm
常见问题Q&A
| Q1: 样品溶液中存在的物质是否会影响标记反应？ |
| A1:
取决于存在的物质种类。 在确认溶液中含有哪些物质后，对样品进行相应的纯化。 样品中共存的带有氨基的化合物和分子量超过10,000的化合物会降低标记效率，并且由于其分子量高，不能被过滤管去除。即使是没有氨基的化合物，高分子量的杂质也会造成过滤器的堵塞，从而影响标记和纯化。请在使用前对样品进行纯化。
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| Q2:回收标记体所使用的WS buffer是否有细胞毒性？ |
| A2: WS buffer中含有几乎不会对细胞产生毒性的稳定剂（表面活性剂）。如果无论如何还是介意表面活性剂，可以根据自身习惯来选择合适的缓冲液来回收标记体。 |
| Q3:如果用含有血清的培养基回收标记体，是否会影响观察？ |
| A3: 血清中的成分虽然不会对AcidSensor的性能产生影响，但是由于血清中的蛋白质也会通过内吞途径进入细胞，可能会与标记的蛋白质的摄取产生竞争。请您根据自身实验目的进行判断。 |
| Q4:如何计算标记率？ |
| A4: A用WS buffer 5倍稀释标记体，然后检测500 nm和280 nm处的吸光度，按照下列公式进行计算，得出标记率。
A500： 500 nm 的吸光度 A280： 280 nm 的吸光度 εprotein： 蛋白质的280 nm处的摩尔吸光系数 NH2-Reactive AcidSensor 在WS buffer中的 A500 的摩尔吸光系数为[48400]。 NH2-Reactive AcidSensor 在280nm和500nm的吸光度、280nm/500nm的比值为[0.16]。 |
| Q5:每个蛋白质分子上会有多少个AcidSensors标记上？ |
| A5:对于小鼠IgG，我们已经确认每个分子平均有三个AcidSensors被标记。 |