NEB代理 , 核酸纯化 , 基因组DNA提取

产品资料 – 核酸纯化 – 基因组DNA提取

Monarch® 高分子量 DNA 提取试剂盒(细胞和血液)                             

货 号
规 格
价 格(元)

#T3050L
50 preps
4,799.00

#T3050S
5 preps
839.00

      


特性

Ÿ 用于从细胞和血液中提取高分子量 DNA

Ÿ 提取纯化的 DNA 片段大小达到 Mb 范围

Ÿ 通过改变裂解过程中的离心速度,可轻松调节提取 DNA 的片段大小

Ÿ 操作流程简单、便捷(细胞样品 30 分钟,血液样品 60 分钟)

Ÿ  获得的 DNA 产量、纯度和完整性极佳

Ÿ 高效去除 RNA

Ÿ 快速、高效的洗脱

Ÿ 包含 RNase A 和蛋白酶 K

Ÿ 是长片段测序的理想选择

产品说明

Monarch® 高分子量 DNA 提取试剂盒(细胞和血液)为从细胞和血液中提取完整的高分子量(HMW) gDNA 提供了快速的操作流程。该试剂盒利用标准的实验仪器,将以下步骤整合优化,加速了提取过程。实验流程包括:将细胞温和裂解、根据需要提取长度不同的 DNA 片段、以及将 DNA 附着于大玻璃珠表面。根据标准流程提取的 DNA 在 50-250 kb 之间,如果将离心速度降到最低,提取的 DNA 可达 Mb 范围。纯化后的 DNA 产量和纯度极高,且几乎完全不含 RNA。细胞样品的提取时间仅为 30 分钟,血液样本需要红细胞裂解,可在 60 分钟内提取完成。A260 / A280 检测纯度为 1.80-1.90,A260 / A230 检测纯度为 2.2-2.5,实验操作简单、重复性好,纯化后的 HMW DNA 适用于多种下游应用,包括长片段测序(Oxford NanoporeTechnologies®和 PacificBiosciences®),光学图谱(BionanoGenomics®)和 Linked-Reads 基因组组装。

图 1:使用 Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒从细胞中提取纯化 HMW DNA 的操作流程
 
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2:使用 Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒从血液中提取纯化 HMW DNA 的操作流程

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3Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒从血液和细胞中提取 HMW DNA 的重复性好

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使用 Monarch® 高分子量 DNA 提取试剂盒(细胞和血液)提取 DNA。提取样品为 1 x 106 新鲜 HEK293 细胞和 500 µl 新鲜人血样,按照试剂盒说明使用电泳图上方标注的离心速度进行制备。从平行试验样本中分别取 500 ng DNA 产物通过 PFGE 分离(在 BioRad® CHEF-DR® III 系统上,使用 1% 琼脂糖凝胶,6 V / cm,13℃ 电泳 20 小时,切换时间为 0.5-94 秒)。各样品的产量和纯度见下表标注。分子量标准为 Lambda PFG Ladder(NEB#N0341)。
 
图 4:在从细胞和血液中提取 HMW 基因组 DNA 的裂解过程中,使用不同的离心速度可调节提取片段长度
 
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将 1 x 106 HEK 293细胞和 500 μl 新鲜人血样一式两份提取 HMW DNA。在裂解步骤中,按照图中标注的速度离心样品,以控制 DNA 的片段化。从平行实验样本中取等量的 DNA 产物(细胞:500 ng;血液:650 ng)通过 PFGE 分离(在 BioRad® CHEF-DR® III 系统上,使用 1% 琼脂糖凝胶,6 V / cm,13℃ 电泳 20 小时,切换时间为 0.5-94 秒)。各样品的产量、纯度和 DIN 值见下表标注。分子量标准为 Lambda PFG Ladder 和 Lambda DNA-Hind III 消化 (NEB #T3041 and #N3012) 。
 
图 5:细胞和血液样本上样量与 DNA 产量的线性相关性
 
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 根据说明书操作方案,将 HEK293 培养细胞和来自不同供体的新鲜人血样作为样品提取 HMW DNA 并记录产量数据,裂解步骤中离心速度为 2,000 rpm。将原始样品稀释成 5 个不同的浓度,以覆盖建议上样量范围。细胞样品(≤5×105)和血液样品(<500 µl)使用低样品量推荐的上样体积进行纯化。在测量范围内,上样量与产量呈高度线性相关。