NEB代理 , 核酸纯化 , 基因组DNA提取

产品资料 – 核酸纯化 – 基因组DNA提取

Monarch® 高分子量 DNA 提取试剂盒(组织)                             

货 号
规 格
价 格(元)

#T3060L
50 preps
5,399.00

#T3060S
5 preps
899.00

      


特性

·        用于从组织、细菌和其它样品(酵母、昆虫、两栖动物)中提取高分子量 DNA

·        从软组织和细菌中提取纯化的 DNA 片段大小达到 Mb 范围

·        对于一些样品,通过改变裂解过程中的离心速度,调节提取 DNA 的片段大小

·        操作流程简单、便捷(组织和细菌样品 90 分钟)

·        获得的 DNA 产量、纯度和完整性极佳

·        快速、高效的洗脱

·        是长片段测序的理想选择

       ·        包含 RNase A 和蛋白酶 K,以及微管研棒便于样品匀浆

 

产品说明

 Monarch® 高分子量 DNA 提取试剂盒(组织)为从组织、细菌及其它样品(包含酵母、昆虫和两栖动物)中提取完整的高分子量(HMW)gDNA 提供了快速的操作流程。针对于组织的提取方案为:首先使用研棒匀浆和蛋白酶 K 搅拌裂解样品,然后进行蛋白质去除,并将提取的 DNA 附着到大玻璃珠的表面。如果提取样品为细菌,则需要在蛋白酶 K 消化之前,使用溶菌酶对细菌细胞壁进行充分裂解。根据标准流程提取的 DNA 在 50-250 kb 之间,如果将离心速度降到最低,提取的 DNA 片段可达 Mb 范围。纯化后的 DNA 产量和纯度极高,且几乎完全不含 RNA。组织和细菌样品提取时间为 90 分钟。组织和细菌 A260 / A280 检测纯度为 1.8-1.9,组织 260/230 检测纯度为 2.1-2.5,细菌 260/230 检测纯度为 2.1-2.2。纯化后的 HMW DNA 适用于多种下游应用,包括长片段测序(Oxford NanoporeTechnologies®和 PacificBiosciences®),光学图谱(BionanoGenomics®)和 Linked-Reads 基因组组装。

1:使用 Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒从组织中提取纯化 HMW DNA 的操作流程

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2Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒(组织)可从多种样品中高效提取纯化高质量的 HMW DNA

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使用 Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒(组织)提取 HMW 基因组 DNA。提取样品为:冻存大鼠肾脏 10 mg、新鲜小鼠肝脏 10 mg、冻存小鼠大脑 20 mg、新鲜小鼠肌肉 20 mg、冻存大肠杆菌 2 x 109、蜡样芽孢杆菌 2 x 108、新鲜非洲爪蟾 4 mg、新鲜酿酒酵母 3.8 x 108 和冻存埃及埃及斑蚊 15 mg。参照试剂盒说明书操作,离心速度为 2000 rpm。酿酒酵母使用经调整的操作流程。从平行实验样本中分别取 500 ng DNA 产物通过 PFGE 分离(在 BioRad® CHEF-DR® III 系统上,使用 1% 琼脂糖凝胶,6 V / cm,13℃ 电泳 20 小时,切换时间为 0.5-94 秒)。各样品的产量和纯度见下表标注。分子量标准为 Lambda PFG Ladder(NEB#N0341)。

3:在从组织和细菌中提取 HMW 基因组 DNA 的裂解过程中,使用不同的离心速度可调节提取片段长度

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使用 Monarch 高分子量 DNA 提取试剂盒(组织)提取纯化 HMW 基因组,测试样品为小鼠肾脏(10 mg,图 3A)和大肠杆菌 NEB10 beta(1 x 109 细胞,图 3B)。在裂解步骤中,按照图中标注的速度离心样品,以控制 DNA 的片段化。从平行实验样本中取等量的 DNA 产物(小鼠肾脏:300 ng;大肠杆菌:500 ng)通过 PFGE 分离(在 BioRad® CHEF-DR® III 系统上,使用 1% 琼脂糖凝胶,6 V / cm,13℃ 电泳 20 小时,切换时间为 0.5-94 秒)。分子量标准为 Lambda PFG Ladder(NEB#N0341)。各样品的产量、纯度和 DIN 值见下表标注。