NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶,Quick Ligation™ 快速连接试剂盒#M2200L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

Quick Ligation 快速连接试剂盒

#M2200L 150 次反应

#M2200S 30 次反应

特别提供

快速末端平齐化™ 和快速连接试剂盒
#E0542S 20 次反应
#E0542L 100 次反应

特性

 5 分钟快速连接粘性末端或平末端
 室温下即可进行连接反应

 T/A 克隆
 dsDNA 切刻修复 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶

概述

本试剂盒在室温(25℃)反应 5 分钟,即可完成 DNA 粘性末端或平末端的连接反应。 

快速连接试剂盒组份

– 快速 T4 DNA 连接酶(重组酶)
– 2X 快速连接反应缓冲液 

2X 快速连接反应缓冲液

132 mM Tris-HCl,20 mM MgCl2,2 mM DTT,2 mM ATP,15% 聚乙二醇(PEG 6000),pH 7.6 @ 25℃。

质保声明

该试剂盒经过严格的质量控制检测,以确保该产品的最高纯度和效率。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。

注意事项

用快速连接试剂盒能使大多数连接反应在 25℃ 条件下 5 分钟甚至更短时间内达到反应终点,增加反应时间不会提高反应效率。事实上,连接 1 小时后转化效率会降低,如果 25℃ 过夜反应,转化效率会下降 75%。

电转化可以使转化效率提高几个数量级。在用快速连接反应产物做电转化前,一定要降低 PEG 浓度。推荐使用柱离心式 DNA 纯化方法,或选择电转连接酶(NEB #M0369)。 |

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快速连接进程曲线:LITMUS 28i 载体经 EcoRV 切割(平齐末端)或 HindIII 切割(粘性末端)后,用小牛肠碱性磷酸酶(CIP)处理,胶回收纯化。插入片段来自 HaeIII 消化的 φX174 DNA 产物(平齐末端)或HindIII 消化的 λDNA 产物(粘性末端),插入片段和载体的比例为 3:1,使用快速连接试剂盒进行连接。连接产物转化入化学方法制备的大肠杆菌感受态细胞,在 LB-amp 平板上 37℃ 过夜培养。