NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 等温扩增和链置换

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 等温扩增和链置换

WarmStart® 荧光 LAMP/RT-LAMP 试剂盒(含 UDG)                             

货 号
规 格
价 格(元)

#E1708L
500 rxns
13,099.00

#E1708S
100 rxns
3,279.00

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产品特点

 设计 LAMP 引物,请使用 NEB LAMP Primer Design Tool

·为环介导等温扩增(LAMP)提供便捷的一步法解决方案,可用于 DNA 或 RNA(RT-LAMP)样品
·预混液含热敏 UDG 和 dUTP,降低残留污染风险
·包含荧光染料,可对 LAMP/RT-LAMP 反应进行实时荧光测量
·温启动技术可在室温下抑制酶活性
·如需了解使用 RT-LAMP 进行 COVID-19 快速筛查,请点击 Learn more
·试剂盒中的预混液(NEB #M1708)和 LAMP 荧光染料(NEB #B1700)可单独提供
 

产品描述

 WarmStart 荧光 LAMP/RT-LAMP 试剂盒(含 UDG)为 LAMP/RT-LAMP 的实时荧光检测提供了便捷的一步法解决方案。LAMP 和 RT-LAMP 是一种常用等温扩增技术,通过使用 LAMP 特异性引物(用户自备)和链置换 DNA 聚合酶进行靶标核酸的快速检测。该试剂盒包含的 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)(NEB #M1708),是在优化后 LAMP 缓冲液中混入了 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶均经过基因工程改造,提高了在 LAMP 和 RT-LAMP 反应中的性能。试剂盒还提供 50X LAMP 荧光染料,用于实时荧光检测。

 
由于先前扩增的产物会无意中成为后续反应的底物造成污染,因此预混液中的 dUTP 和热敏 UDG 可有效降低残留污染风险。热敏 UDG 在温度>50℃时可完全失活,因此对反应没有影响。
 
图 1:LAMP/RT-LAMP 预混液和适用样品类型
 
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NEB 基于 pH 变化的 WarmStart 变色LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含/不含 UDG)(NEB #M1804)(NEB# M1800)缓冲力低,因此可使用 pH 敏感染料进行可视化扩增检测。基于 pH 值改变而产生的颜色变化(如粉红变黄色)所需缓冲力要低,高缓冲力样品或酸性样品可能会影响颜色变化,因此,这种方法限制了检测样品的种类。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含/不含 UDG)(NEB #M1708,NEB #E1708)(NEB #E1700)是完全缓冲的,可检测所有样品类型,适用于多种检测方法,包括荧光或其它变色染料(例如:羟基萘酚蓝)
 
图 2:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)对人 DNA 和 RNA 靶标进行稳健检测
 
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 使用 WarmStart 荧光 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(不含 dUTP/UDG)(NEB #M1700 试剂盒中的组分)和 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)(NEB #M1708)进行 RT-LAMP(RNA 靶标)或 LAMP(DNA 靶标)实验。反应加入 1X LAMP 引物和 1X LAMP 荧光染料后,分别加入三个数量级的 Jurkat RNA 或 Jurkat DNA (10 ng-0.1 ng)和无模板对照(NTC),每个样品做 4 个重复,形成 25 µl 反应体系,置于 96 孔板中 65℃孵育 40 分钟。使用实时热循环仪(Bio-Rad® CFX96)中的 SYBR/FAM 通道进行 15 秒一次的荧光检测。每个点代表荧光信号超过仪器阈值的时间。除了个别说明外,每个样品都检测到所有 4 个重复(注:如果各重复的检测时间相似,则检测点重叠)。总体而言,各样品检测结果显示:NEB #M1700 和 NEB #M1708 性能一致。无模板对照均无扩增。
 
图 3:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)与自动化反应装置兼容
 
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通过手动或 TEMPEST® 自动化液体处理工作站(96 孔,25 µl 反应)建立针对于合成 SARS-CoV-2 RNA 样品的 LAMP 检测体系。检测样品为:阳性样品(人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA)或无模板对照(NTCs)。经 65℃ 孵育 40 分钟,使用 1X LAMP 荧光染料在实时荧光仪器(Bio-Rad CFX96)中的 SYBR/FAM 通道检测。结果显示:两种体系的检测时间和最低检出限(LOD)结果一致。