酶联免疫吸附试验 (ELISA)
ELISA 或酶联免疫吸附测定是一种基于板的免疫测定，用于检测和量化抗体、蛋白质、激素或肽等生物分子，以及表征蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸相互作用。在 ELISA 中，感兴趣的靶标，通常是抗原，被固定在固体表面上，随后用与酶如辣根过氧化物酶 (HRP)或碱性磷酸酶 (AP)缀合的抗体进行探测。量化是通过与底物孵育来实现的，底物由酶催化，产生可测量的副产物。
ELISA（酶联免疫吸附试验）概述
ELISA 测定传统上在 96 孔聚苯乙烯微量滴定板中进行。这些板被设计成被动结合和固定抗原，通常通过直接吸附到微量滴定板表面或间接通过预包被的“捕获”抗体。固定后，将一抗引入样品，与抗原形成免疫复合物。一抗可以与酶共价标记，例如 HRP，或者如果一抗用生物素标记，则可以使用酶标记的二抗或链霉亲和素偶联物间接检测一抗。检测是通过与合适的底物孵育来评估结合酶的活性来实现的，这会产生可测量的副产物。基材的灵敏度和与成像设备的兼容性不同，
表示使用目标特异性抗体的直接和间接抗原检测。
实验方案：比色直接 ELISA
用测试抗原包被 ELISA 板，密封板并在 4°C 下孵育过夜
用所需的缓冲液去除涂层溶液并洗涤板 2 次
在 4°C 下用所需的封闭溶液封闭板 1 小时
用缓冲液洗板 3 次
与 HRP 标记的一抗在室温下孵育 1 小时
用缓冲液洗板 4 次
用 ReadiUse™ TMB 底物溶液（货号11012）在室温下孵育板 15-30 分钟。
使用 ELISA 酶标仪测量 650 nm 处的吸光度信号
| 直接 ELISA 概览 | |
| 应用 |
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| 好处 |
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| 缺点 |
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实验方案：比色间接 ELISA
用测试抗原包被 ELISA 板，密封板并在 4°C 下孵育过夜
用所需的缓冲液去除涂层溶液并洗涤板 2 次
在 4°C 下用所需的封闭溶液封闭板 1 小时
用缓冲液洗板 2 次
与未偶联的一抗在室温下孵育 1 小时
用缓冲液洗板 4 次
与 HRP 标记的二抗（在封闭缓冲液中）在室温下孵育 1 小时
用缓冲液洗板 4 次
用 ReadiUse™ TMB 底物溶液（货号11012）在室温下孵育板 15-30 分钟。
使用 ELISA 酶标仪测量 650 nm 处的吸光度信号
| 间接 ELISA 概览 | |
| 应用 |
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| 好处 |
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| 缺点 |
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实验方案：比色夹心 ELISA
用捕获抗体包被 PCV 微量滴定板的孔，密封板并在 4°C 下孵育过夜
用所需的缓冲液去除涂层溶液并洗涤板 2 次
在 4°C 下用所需的封闭溶液封闭板 1 小时
用所需的缓冲液洗板 2 次
将样品添加到每个孔中，在 37°C 下孵育 2 小时
取出样品并用所需的缓冲液清洗板 2 次
与未偶联的检测抗体在室温下孵育 1 小时
用所需的缓冲液清洗板 4 次
与 HRP 标记的二抗（在封闭缓冲液中）在室温下孵育 1 小时
用所需的缓冲液清洗板 4 次
用 ReadiUse™ TMB 底物溶液（货号11012）在室温下孵育板 15-30 分钟。
使用 ELISA 酶标仪测量 650 nm 处的吸光度信号
| 夹心 ELISA 概览 | |
| 应用 |
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| 好处 |
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| 缺点 |
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