碱性磷酸酶显色试剂盒BCIP/NBT

产品描述:

本试剂盒应用于胚胎干细胞(ES)和诱导多功能干细胞(iPS)的鉴定,以及免疫组化、免疫印迹等实验中的碱性磷酸酶显色。试剂盒内的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/硝基四氮唑蓝(NBT)是碱性磷酸酶(AP)的常用底物之一,BCIP在AP的催化下会被水解生成强反应性产物,后者与硝基四氮唑蓝(NBT)反应生成不溶性产物,使之呈现深蓝色至蓝紫色。

 

操作指南:

1. AP显色工作液的配制:

取20μl 150×NBT溶液加入到3ml碱性磷酸酶显色反应缓冲液,充分混合均匀,再加入30μl 100×BCIP溶液,配置成工作液,如需改变工作液体积,可按相同比例适量配制。1h内使用。

2.  显色步骤:

a)  检测细胞的内源性碱性磷酸酶:吸出培养基,PBS润洗3次,加入4%多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液,使用TBST清洗三次,加入显色工作液,室温避光孵育5-30分钟,显色至预期深浅后,用PBS润洗1次,然后保存于PBS溶液中,显微镜下观察结果。

b)  检测组织切片或膜上结合的碱性磷酸酶抗体:使用洗涤液洗涤完后,加入适量工作液,保证完全覆盖样品表面,室温避光孵育5-30分钟,显色至预期深浅后,去除工作液,用蒸馏水清洗1-2次终止显色反应。

 

注意事项:

1. BCIP和NBT对人体有刺激性,请注意适当防护。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件:

2-8℃保存,100×BCIP溶液和150×NBT溶液需避光保存,一年有效。

我司所售出产品仅供于科研研究用途(非临床科研研究),每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的

英文名字:BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit