UP04/Amino Acid Uptake Assay Kit-氨基酸摄取能力检测试剂盒

货号:UP04
氨基酸摄取能力检测试剂盒
Amino Acid Uptake Assay Kit
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测
添加探针后无需清洗操作,可直接检测

选择规格:20tests,100tests

试剂盒内容

UP04 Amino Acid Uptake Assay Kit

20tests

BPA Solution

35u×1

BPA Dilution Buffer

35 ul×1

Probe Solution

15 ul×1

100 tests

BPA Solution

175ul×1

BPA Dilution Buffer

175 ul×1

Probe Solution

75 ul×1

产品概述

氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源,对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此,癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进,造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少,更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现,癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高,说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。

在癌症免疫治疗领域,治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关,免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如,随着免疫细胞的衰老,代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此,通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。

氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后,探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合,发出荧光(λex=360 nm,λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测,通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力,以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。

本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。

运用领域

抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外,通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力,还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。

操作步骤

实验例

使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。

<检测条件>

细胞:HeLa cells

培养基:MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件:1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min

检测仪器:荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)

检测仪器:荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)

<检测条件>

检测仪器:流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)

与传统方法比较

与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比,操作时间大幅减少。

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产品名 包装 价格 货号
 Glucose Uptake Assay Kit-Blue 1 set 3,980 UP01
    Glucose Uptake Assay Kit-Green 1 set 3,980 UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red 1 set 3,980 UP03

常见问题Q&A

Q:BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的?
A:有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外,同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。
Q:已经有检测实例的细胞系有哪些?
A:贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251;悬浮细胞有MOLT4。
Q:BPA被细胞摄入后,是否会被分解或代谢掉?
A:BPA的构造非常稳定,实验操作范围的过程中不会被分解。
Q:BPA被细胞摄入后,能否进行固定化操作?
A:由于探针会从细胞内向细胞外泄漏,所以无法进行染色后的固定化操作。
Q:BPA被细胞摄入后,是否会在特定部位积累?
A:被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。
Q:BPA uptake solution,Working solution能否长时间保存?
A: BPA uptake solution,Working solution无法长期保存,请现配现用。
Q:如果荧光信号没有变化,我该怎么办?
A:主要可能的原因有以下两点:
①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution的浓度。(5~50倍稀释)
②Working solution发生变质,请重新配置Working solution,保证现配现用。
Q:如果荧光背景较高, 我该怎么办?
A: 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。
Q:BPA是否可以定量检测?
A:无法进行定量检测,本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。
Q:检测荧光时使用什么样的微孔板比较合适?
A: 有检测实例的微孔板如下: