G265/DNA Damage Detection Kit – γH2AX- Green

货号:G265
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -绿色
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal共染,检测衰老细胞DNA损伤
储存条件:0-5°C,注意防止吸潮
运输条件:常温

选择规格:1 set

试剂盒内含
1 set
.Anti yH2AX antibody X1
.Secondary antibody – Green X1
.Blocking Solution 22 mlX1

性质

该试剂盒,可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂,即使是第一次使用的人操作起来也很方便,并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤检测原理

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂,H2AX(一种组蛋白H2X的亚种),当出现DNA双链断裂时,会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX(γH2AX),作为DNA损伤的标志物,有望被用来作为评估化学物质,活性氧,紫外线,辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来,γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

试剂盒特点

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内,您可以马上检测并获得数据。

*对于多次染色和组织染色,请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

 

产品名称 荧光 激发发射波长
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green 绿色 λex : 494 nm、λem : 518 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red 红色 λex : 550 nm、λem : 566 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red 深红色 λex : 646 nm、λem : 668 nm

细胞衰老实验例

在评估细胞衰老时,应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

概要 检测指标 论文
在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老,相反,通过添加自噬诱导剂后,细胞衰老被抑制。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 Laura Garcia-Prat, et. al., Nature2016529, 37.
在2型糖尿病模型中,证实了衰老指标活性增加,DNA损伤水平增加。 γH2AX、SA-β-gal、p21 Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab2013305(8), E951.
在缺乏特定蛋白质(BRE)的小鼠成纤维细胞中,观察到细胞衰老明显增强。 γH2AX、SA-β–gal W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
在棕榈酸处理的HepG2细胞中,染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少,所有衰老指标的活性均得到增强。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 20173, 11.
在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中,证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 γH2AX、SA-β-gal、p16  

R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  201817, 259.

<结合其他指标的细胞实验例>

<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后,用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1%Triton-X / PBS进行膜渗透处理后,用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX(深红色):Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal:Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI:Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm

常见问题Q&A

Q:抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存?
A:无法保存,请当天使用。
Q:可以使用试剂盒内含的封闭液以外,其他的试剂进行稀释抗体吗?
A:我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。
用其他溶液稀释可能会增加背景。

Q:多重染色的注意点
A:由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗,因此在共染色其他抗原时,请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。
Q:组织染色的注意点
请注意,不能用于小鼠组织的组织染色。

当需要对小鼠组织进行染色时,抗小鼠抗体(荧光标记的二抗)会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附,从而增加背景。

<试剂盒中包含的抗体信息>

来源 交叉性
一抗 小鼠 人、小鼠
荧光标记的二抗 山羊 小鼠IgG